实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

2024-05-11 19:02

1. 实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

二者结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。
区别:
1、二者系统组成不同
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。
2、二者原理不同
荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光,普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测定PCR最终产物量。
3、二者反应要求不同
荧光定量PCR对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通PCR可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同
荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,反之不行。
5、二者测量成本不同
定量PCR仪价格较为昂贵,普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。
参考资料来源:百度百科-实时荧光定量PCR
参考资料来源:百度百科-PCR

实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

2. 实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

二者结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。
区别:
1、二者系统组成不同
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。
2、二者原理不同
荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光,普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测定PCR最终产物量。
3、二者反应要求不同
荧光定量PCR对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通PCR可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同
荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,反之不行。
5、二者测量成本不同
定量PCR仪价格较为昂贵,普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。
参考资料来源:百度百科-实时荧光定量PCR
参考资料来源:百度百科-PCR

3. 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?

1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算;
2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算;
3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性;
4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起;
5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价值了,平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。

扩展资料:
PVR的循环参数:
1、预变性;
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤;
循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败。
3、引物退火;
退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。
4、引物延伸;
引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度)。但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数;
大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸;
在最后一个循环后,反应在72℃维持10-30分钟.使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链。
参考资料来源:百度百科—实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?

4. PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别

原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光.
反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段.如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳.
结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行.荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的.
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5. 实时荧光定量PCR技术的原理什么?


实时荧光定量PCR技术的原理什么?

6. PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别?

PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。(来自百度百科)
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。(来自百度百科)
普通PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料(SYBR Green 或Taqman 探针等等)。以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。

7. 实时荧光定量PCR的关于名称

根据MIQE(Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) 的指导方针,qPCR为Quantitative real-time PCR的简称,RT-qPCR指的是Reverse transcription–qPCR,RT-PCR仅用来表示Reverse transcription polymerase chain reaction,而不是Real-time PCR ,但是有少数作者并没有坚持这一原则。

实时荧光定量PCR的关于名称

8. 实时荧光定量PCR技术原理是什么?

聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析,分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生。所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行, PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
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